Purificação e caracterização de lectina(s) de Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott (Taioba): hemaglutinina(s) com potencial efeito citotóxico
Nome: ANA PAULA PASSOS DE PAIVA
Data de publicação: 19/03/2025
Banca:
Nome |
Papel |
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| JAIRO PINTO DE OLIVEIRA | Examinador Interno |
| JULIANA BARBOSA COITINHO GONCALVES | Presidente |
| MARIANA AMALIA FIGUEIREDO COSTA | Examinador Externo |
Resumo: Lectinas são proteínas de ligação a carboidratos que aparecem em todos os domínios da vida e, devido à habilidade de se ligar especificamente e reversivelmente em carboidratos de glicoconjugados através de sítios/domínios específicos – sendo conhecidas como aglutininas – desempenham papel essencial em vários processos biológicos. O potencial antimicrobiano e antitumoral dessas proteínas têm sido explorado para o desenvolvimento de fármacos alternativos e/ou adjuvantes. A presença de lectinas em folhas e raízes de várias espécies vegetais tem sido descrita, as quais são associadas com respostas inflamatórias, capacidade antioxidante, antiproliferativa, efeitos pró-apoptóticos, dentre outros. Este trabalho teve como objetivo purificar e caracterizar bioquímica e funcionalmente frações hemaglutinantes – lectina(s) – de Xanthosoma sagittifolium (L.) – Taioba – uma Planta Alimentícia Não Convencional (PANC). O processo de purificação foi monitorado por ensaios de hemaglutinação e SDS-PAGE (presença de bandas com massa molecular entre 12- 14 kDa – unidade monomérica de lectinas). Frações hemaglutinantes foram obtidas por precipitação salina sequenciada ((NH4)2SO4 15% e 35%) a partir do extrato proteico de folhas e raízes. A fração do extrato foliar precipitada com 15% foi selecionada para a continuidade do processo de purificação utilizando cromatografia de exclusão molecular em sistema HPLC a partir da qual se obteve duas frações hemaglutinantes parcialmente purificadas. O perfil proteico dessas frações apresentou bandas com massa molecular da unidade monomérica e seus múltiplos, sugerindo a formação de arranjos supramoleculares, característica comum de lectinas. Foi demonstrado que as frações obtidas após a precipitação salina do extrato foliar (P15F e P35F) apresentam atividade hemaglutinante com especificidade de ligação à manose e não diferencia os tipos sanguíneos (ABO). A atividade hemaglutinante de P15F se mostrou mais efetiva em pH ideal entre 7,5 e 7,9 e temperatura de 37°C, sendo dependente do íon magnésio. Utilizando o ensaio de viabilidade celular à base de resazurina, foi demonstrado que as frações hemaglutinantes – provenientes da exclusão molecular – foram citotóxicas de forma dose-dependente (~ 0,1 g a 53 g) para as linhagens cancerosas de glioma de rato (C6), carcinoma de cólon humano (RKO) e adenocarcinoma maligno primário de ovário humano (TOV-21G), com exceção da linhagem tumoral de glioblastoma humano (U373), reduzindo a viabilidade em até 78%. Ensaios preliminares não identificaram atividade antifúngica para Trichoderma reesei. Neste trabalho, duas frações hemaglutinantes com potencial citotóxico foram purificadas parcialmente, o que representa os primeiros passos para sua completa caracterização bioquímica e funcional como também a exploração do potencial biotecnológico.
